question

Como voce usa enzima de restricao para cortar o DNA em fragmentos de diferentes?

Eu tenho a enzima de restrição e a amostra de DNA. Qual é o procedimento usando a enzima de restrição para cortar a amostra de DNA em fragmentos de diferentes? Que materiais/equipamentos eu preciso usar? Por favor, seja específico e não em muitos termos técnicos. Obrigado!


resposta Resposta

Usar enzimas de restrição (RE):
1. Você precisará de saber algumas informações sobre o RE que você estiver utilizando quais são as condições ideais em que o RE funciona (particularmente, tampão de pH, concentração de sal, outros íons necessários para a atividade de enzima, temperatura).
2. Para executar a reação de clivagem, você vai precisar de concentrado de tampão estéril (livre de DNase) e bidestilada; pequenos tubos de ensaio no qual executar a reação; um banho de água para controlar a temperatura de reação; Pipetas para medir com precisão os volumes de líquido.
3. Não saber se está a cortar o DNA para a separação dos fragmentos ou clonagem, vou sugerir de equipamento para ambos:



Separação de fragmentos:
r. médio separação (por exemplo, gel de agarose)
b. marcador de dye(s) para seguir a migração da amostra
c. Power pack para fornecer corrente elétrica para separação de efeito do DNA fragmentos
d. meios de Visualizar o DNA fragmentos no gel - por exemplo, corantes que reagem com o DNA

Clonagem:
r. plasmídeo em que você colocar o fragmento de DNA pela ligadura.
b. enzimas que permitem que você ligar (covalentemente participar) um fragmento de DNA para o plasmídeo de DNA; todos os buffers, etc. para a reação da ligadura
c. uma cultura de um micróbio específico (bactérias ou fungos) em que você vai transformar (Inserir célula) o plamid recombinante (plasmídeo com o fragmento ligado).
d. adequadas soluções de transformação e os meios de crescimento para permitir que a transformação ocorra.
e. mídia de crescimento sólido seletiva (placas de ágar com crescimento nutrientes e um inibidor que impede o crescimento de células NONtransformed.

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